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Anticuerpo G12

1. ¿Qué secuencias peptídicas reaccionan con G12?

El anticuerpo G12 fue diseñado para reconocer el péptido inmunotóxico 33-mer de la proteína α- gliadina, el cual provoca la enfermedad celíaca (Morón et al., 2008). Más concretamente, la región de reconocimiento en el 33-mer es el epítopo hexamérico QPQLPY. Esta secuencia de reconocimiento se repite 3 veces a lo largo del péptido 33-mer de la gliadina.

El anticuerpo G12 reconoce la prolamina inmunotóxica del trigo, la cebada, el centeno y de algunas variedades de avena Morón et al., 2008). El anticuerpo G12 también es capaz de reconocer de forma específica péptidos inmunogénicos relevantes en muestras hidrolizadas tales como la cerveza, ya que estos péptidos contienen al menos 2 epítopos QPQLPY (Real et al., 2014).

G12 Antobody

2.¿Reacciona el G12 solamente con el fragmento 33-mer de la gliadina?

No. El anticuerpo G12 puede reaccionar con secuencias similares presentes en otras gliadinas (omega, alfa, gamma y beta) y también en gluteninas. El perfil de reconocimiento del G12 ha sido descrito en diversos estudios. (Morón et al., 2008a, Morón et al., 2008b, Real et al., 2014). Existen otras secuencias que pueden reaccionar con el G12 y que se encuentran en los péptidos inmunogénicos del trigo, la cebada y el centeno: QPQLPY, QPQQPY, QPQQPF, QPQLPF, QPQLPL, QPELPY

3. ¿Es válido para detectar gluten en cervezas y otros productos hidrolizados?

 En productos hidrolizados, tales como la cerveza, la proporción relativa de péptidos reactivos para los pacientes celíacos puede variar. Esto es debido a la diversidad de péptidos que resultan tras la fermentación.

En una publicación de hace algunos años (Comino et al., 2012), se analizó una amplia variedad de cervezas con el anticuerpo G12 a través de dos métodos diferentes, ELISA competitivo e inmunoensayo de flujo lateral, obteniendo resultados similares. Posteriormente (Real et al., 2014), se demostró que una cerveza etiquetada legalmente como sin gluten (niveles indetectables de gluten según el ELISA competitivo R5) contenía péptidos de gluten inmunotóxicos para los pacientes celíacos según el ELISA G12 y la espectometría de masas. Para ello, expusimos células del sistema inmune de pacientes celíacos a estos inmunopéptidos y medimos su respuesta.

En otro estudio más reciente, (Picariello et al., 2015) se analizaron muestras de Weissbier (cerveza de trigo) con el anticuerpo G12 y se detectaron péptidos inmunotóxicos. Para este análisis, se utilizó suero de pacientes celíacos como fuente de anticuerpos antigliadina, confirmando que la cerveza de trigo contiene péptidos que reaccionan con el suero de los pacientes celíacos.

4.Existen más de 100 péptidos inmunogénicos del gluten conocidos. ¿Puede el anticuerpo G12 reconocerlos todos?

Detectar todos estos péptidos con un único anticuerpo es casi imposible. Sin embargo, un reciente estudio (Moreno et al., 2016) ha demostrado que el péptido más inmunogénico (responsable del 80-95% de la inmunoreactividad de las células T de los celíacos) puede ser fácilmente detectado con el anticuerpo G12. En contraste, el anticuerpo R5, comúnmente utilizado para la detección de gluten, tan solo reconoce alrededor del 25% de estos péptidos inmunogénicos de la cerveza de cebada.

La correlación entre la reactividad del anticuerpo G12 y la inmunogenicidad de las células T ha sido ampliamente estudiada en productos difíciles de analizar, tales como algunas variedades puras de avenas o de cebada(Comino et al., 2011, Comino et al., 2012).

5. ¿Son las avenas seguras para los celíacos? ¿Son realmente productos sin gluten?

Las avenas están normalmente expuestas a la contaminación cruzada (en el campo y/o durante el proceso de manufacturación). Aún cuando la avena ha sido cultivada y procesada cuidadosamente, esto no significa que sea siempre libre de gluten.

Un estudio del año 2011 (Comino et al. 2011) demostró que no todas las avenas son iguales en cuanto al contenido de péptidos inmunogénicos. Todas las variedades de avena contienen avenina, pero cada una tiene una estructura y secuencia diferente, y sólo algunas de estas variedades podrían ser tóxicas para los pacientes celíacos. El estudio empleó el anticuerpo G12 para analizar diferentes variedades de avena y consiguió clasificarlas en tres grupos diferentes: variedades sin toxicidad, de baja toxicidad y de alta toxicidad. Las características de estas avenas y su inmunogenicidad están mejor estudiadas en otros estudios posteriores. (Real et al., 2012, Comino et al. 2016, Silano et al., 2013).

El gluten de estas variedades de avenas se puso en contacto con células T de pacientes celíacos y éstas respondieron de la forma esperada: solo reaccionaron con las variedades de avena potencialmente inmunotóxicas. Por lo tanto, el anticuerpo G12 es la mejor opción para cualquier compañía que trabaje con avenas sin gluten. En cualquier caso, el gluten del trigo siempre resulta al menos 40 veces más reactivo al anticuerpo G12 que el gluten de la variedad más reactiva de avena. Quizás, sólo los pacientes celíacos más sensibles se verán afectados por las más reactivas de las variedades de avena. Futuros estudios, esclarecerán el nivel umbral de la avena con péptidos inmunogénicos que tienen impacto en la salud de los pacientes celíacos.

6. Un paciente tiene la enfermedad celiaca y sigue una dieta sin gluten. ¿Hay algún método sencillo para averiguar si está siguiendo correctamente la dieta?

Hasta ahora, la única forma de evaluar la adherencia a la dieta sin gluten era o una biopsia, que es muy cara, invasiva y molesta, o un test serológico, que de acuerdo con diversos estudios, no es lo suficientemente preciso (Kaukinen et al., 2002; Tursi et al., 2003; Moreno et al., 2015; Comino et al., 2016) y puede conducir a resultados erróneos como los falsos positivos y negativos.

Biomedal ha desarrollado dos productos basados en el anticuerpo G12 que ayudan a controlar la dieta sin gluten en casa o en la consulta. Estos productos detectan los péptidos del gluten en la orina (GlutenDetect Urine) y en las heces (GlutenDetect Stool) y son los primeros de este tipo en el mercado.

Cuando el gluten se ingiere y alcanza el tracto gastrointestinal, este se rompe en fragmentos más pequeños llamados péptidos y en última instancia, aminoácidos. Algunos de estos péptidos (como el péptido 33-mer) son resistentes a la digestión y traspasan la pared de la mucosa intactos, desencadenando la respuesta inmune en los pacientes celíacos. Estos péptidos serán entonces excretados en la orina o en las heces, y su detección en estos dos tipos de muestras son una evidencia directa de la ingesta de gluten. Un estudio reciente que involucra a 188 pacientes celíacos, muestra que alrededor del 40% tenía niveles detectables de péptidos de gluten en las heces. El estudio utilizó el anticuerpo G12 para la detección de péptidos en heces.

 

Ref. Producto Cantidad
AB-4748 Anticuerpo Antigliadina 33 mer (G12) (Monoclonal de ratón) 0.1 mg
AB-4750 Anticuerpo Antigliadina 33 mer (G12)-HRP (Monoclonal de ratón) 0.1 mg

 

REFERENCIAS

Referencia 1: “Diversity in oat potential immunogenicity: basis for the selection of oat varieties with no toxicity in coeliac disease”. Comino I, Real A, de Lorenzo L, Cornell H, López-Casado MÁ, Barro F, Lorite P, Torres MI, CebollaA, Sousa C. Gut  2011 Jul;60(7):915-22.

Referencia 2: “Molecular and immunological characterization of gluten proteins isolated from oat cultivars that differ in toxicity for celiac disease”. Real A, Comino I, de Lorenzo L, Merchán F, Gil-Humanes J, Giménez MJ, López-Casado MÁ, Torres MI, Cebolla Á, Sousa C, Barro F, Pistón F. PLoS One 2012;7(12):e48365.

Referencia 3: “Identification and molecular characterization of oat peptides implicated on coeliac immune response”. Comino I, Bernardo D, Bancel E, de Lourdes Moreno M, Sánchez B, Barro F, Šuligoj T, Ciclitira PJ,Cebolla Á, Knight SC, Branlard G, Sousa C. Food Nutr Res. 2016 Feb 5;60:30324.

“Sensitive detection of cereal fractions that are toxic to celiac disease patients by using monoclonal antibodies to a main immunogenic wheat peptide”. Morón B, Cebolla A, Manyani H, Alvarez-Maqueda M, Megías M, Thomas Mdel C, López MC, Sousa C. Food Nutr Res. 2008 Feb;87(2):405-14.

“Toward the assessment of food toxicity for celiac patients: characterization of monoclonal antibodies to a main immunogenic gluten peptide”. Morón B, Bethune MT, Comino I, Manyani H, Ferragud M, López MC, Cebolla A, Khosla C, Sousa C. PLoS One. 2008 May 28;3(5):e2294. doi: 10.1371.

“Significant differences in coeliac immunotoxicity of barley varieties”. Comino I, Real A, Gil-Humanes J, Pistón F, de Lorenzo L, Moreno Mde L, López-Casado MÁ, Lorite P, Cebolla A, Torres MI, Barro F, Sousa C. Mol Nutr Food Res. 2012 Nov;56(11):1697-707.